张文福 袁庆霞 李成文 刘育京
提要 向人血浆中加入亚甲蓝染料浓度为1μmol/L，再以10000lux强度的溴钨灯光照射10min，血浆中主要成分的生化指标只有胆红素与尿酸两种代谢产物有明显降低，其余均无明显变化，各种酶活性未发生明显改变。血浆蛋白分子量SDS-PAGE与盘状PAGE电泳未见明显异常。微量免疫电泳与免疫交叉电泳也未见血浆成分免疫原性改变。
关键词 亚甲蓝光敏法 血浆消毒 血浆成分
EXPERIMENTAL OBSERVATION ON INFLUENCE
OF PHOTOACTIVATED METHYLENE BLUE DISINFECTION
ON SOME COMPONENTS OF HUMAN PLASMA
Zhang Wenfu Yuan Qingxia Li Chengwen Liu Yujing
Institute of Microbiology and Epidemiology,
Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071
Abstract
Following the demonstration of inactivating effect of photoactivated methylene blue disinfection on virus, observation on destructive effect of this disinfection method on components of normal human plasma was carried out in the present experiment. The results showed that addition of 1 μmol/L methylene blue to human plasma followed by irradiation with bromine tungsten lamp at intensity of 10 000 lux for 10 min caused only significant decrease in 2 kinds of metabolites, i.e. bilirubin and uric acid, in biochemical indices of the main components of plasma, while the other indices did not change significantly. The activity of various enzymes had no significant change. No significant abnormality in molecular weight SDS-PAGE and disc PAGE electrophoresis of plasma proteins was observed and no change in immunogenicity of plasma components was seen in microimmunoelectrophoresis and crossed immunoelectrophoresis.
Key words photoactivated methylene blue method disinfection of serum plasma component
为了进一步保证临床输血和血制品的安全，我们根据国外文献报道〔1〕，采用了亚甲蓝光敏消毒法对临床用冰冻人血浆进行消毒处理。继在试管内证实了其良好的病毒灭活能力〔2〕后，现将其对正常人血浆成分破坏情况的试验结果报道如下。
1方法
1.1血浆消毒处理
临床用冰冻人血浆（解放军中心血站提供）经25℃水浴融化，按0.9ml分装后，加入10μmol/L亚甲蓝染料（Sigma公司产）0.1ml，充分混匀10min，使染料与病毒结合。再经10000Lux光照（光源为溴钨灯，上海申江灯泡厂产）处理不同时间灭活病毒。于消毒处理前、后，分别测定人血浆成分。
1.2血浆生化指标的测定
用美国产Monarch Plus全自动生化分析仪测定。
1.3血浆蛋白SDS-PAGE电泳分析
按Weber等报告的方法〔3〕，先制作5%和12%的SDS-PAGE胶，将样品以100℃变性处理后，取10μl加样，经12mA电泳6h，考马斯亮蓝R250染色。观察各组分分子量的变化。
1.4盘状PAGE电泳与微量免疫电泳分析
按李成文介绍的方法〔4〕进行。
1.5免疫交叉电泳
按Clarke等报告的方法〔5〕，用巴比妥缓冲液配制1%琼脂，取10ml倾注玻片，在琼脂板阴极处打孔，加样电泳2h。切除样品一侧的凝胶，注入兔抗人血清抗体的琼脂，转90°角进行第二次电泳3h。噻嗪红染色后观察免疫沉淀峰，以判定血浆抗原活性变化。
2结果
2.1血浆生化指标测定结果
实验对比测定了光敏消毒前对照与消毒后血浆中总蛋白、白蛋白、血糖、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、天冬氨酸转氨酶、胆红素、尿素氮、尿酸等10多项生化指标的含量或活性单位。结果，主要指标，如蛋白质、脂类、糖类含量与各种酶活性均无明显变化（低于10%的可接受水平），只有胆红素与尿酸两种代谢产物有明显降低（附表）。与对照有显著性差异（P<0.01）。
附表 亚甲蓝光敏法对血浆生化指标的影响
Table Influence of photoactivated methylene blue method on plasma biochemical indices
测定项目
Item measured 单位
Unit 测定结果（X±S）
Results of measurement
对照Control 消毒10 min
Disinfection for 10 min 消毒30 min
Didinfection for 30 min
总蛋白Total protein g/L 51.5±3.8 49.9±0.2 50.3±0.4
白蛋白Albumin g/L 37.9±1.3 36.6±0.5 36.9±0.2
葡萄糖Glucose mmol/L 19.41.3 17.9±0.7 18.7±0.1
甘油三脂Triglyceride mmol/L 2.7±0.1 2.6±0.1 2.5±0.1
胆固醇Cholesterol mmol/L 0.83±0.04 0.8±10.01 0.82±0.01
乳酸脱氢酶Lactic dehydrogenase IU/L 159.7±8.1 151.7±4.0 140.0±1.7
碱性磷酸酶A lkaline phosphatase IU/L 90.3±6.1 92.7±2.9 88.3±4.0
天冬氨酸转酶AST IU/L 30.7±0.6 29.3±3.1 32.0±1.7
丙氨酸转氨酶ALT IU/L 19.7±2.1 18.3±0.6 19.3±2.9
胆红素Bilirubin μmol/L 9.1±0.7 4.0±0.4 2.9±0.2
血尿素氨BUN μmol/L 5.20.2 5.2±0.1 5.4±0.3
肌酐Creatinine μmol/L 79.6±4.8 77.2±0.9 78.8±0.8
尿酸Uric acid μmol/L 146.7±11.5 123.5±13.4 81.1±4.7
注:表中数据为3次试验的结果。
Note: The figures in the table are results of 3 tests.
2.2 血浆蛋白分子量的变化
在SDS-PAGE电泳图中，经亚甲蓝光敏消毒处理后的血浆与对照血浆相比，蛋白质分子条带基本无变化。说明无蛋白质分子多聚体形成，也无蛋白质分子降解（图1）。在盘状电泳图谱中，同样未观察到病毒灭活处理前后，血浆蛋白分子条带的改变（图2）。
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