大江 发表于 2014-9-28 08:02:58

新型生物可降解材料PHB的全身毒性试验

         
       汤苏阳 艾玉峰 董兆麟 杨青芳 施新猷

摘 要 目的:评价生物可降解性材料聚-β-羟基丁酯在动物体内的急、慢性全身毒性。方法:参照ISO对医用植入材料的评价标准和所推荐的生物学试验,对PHB进行其浸出液经静脉注射后的急性全身性毒性反应和PHB长期埋植动物体内血液常规、血液生化指标的观察。结果:PHB在动物体内的急性全身性毒性反应为无毒,慢性长期埋置PHB在动物体内不引起明显的血液常规、血液生化学的改变。结论:新型可降解材料PHB具有优良的生物相容性及安全性。
关键词 生物可降解材料 PHB 全身毒性反应试验 生物相容性 生物安全性

THE ACUTE AND CHRONIC GENERAL TOXICITY TO A NEW BIODEGRDABLE POLY-3-HYDROXYBUTYRATE

Tang Suyang,Ai Yufeng,Dong Zhaolin,Yang Qingfang,Shi Xinyou
(Plastic Surgical Center of Xi'Jing Hospital The Fourth Military Medical University Xi'an 710032)

Abstract Objective:To evaluate the acute and chronic general toxicity to a new biodegradable PHB. Methods:According to ISO about biological evaluationand and test of medical materias. We carried out a systemic biological evaluation of domestic medical PHB including acute general toxicity and embeded under skins for long time to proceed the blood routine examination and serum biochemical tests. Result:The acute general toxicity of PHB is nearly no The chronic general toxicity of PHB embedding suggest no significative changes in the blood routine examination and serum biochemical tests.Conclusion: The result showed that this new medical biodegradable PHB has good biocompatibilty and biological safety.
Key words Biodegradable material PHB General Toxicity Biocompatibility Biological safety

  合成的或天然的可降解聚合物正被广泛地应用于生物医学〔1〕,特别是组织工程和遗传工程以及医学外科领域〔2,3〕。聚β-羟基丁酯 (Poly-3hydraxybutyrate 简称PHB)是一种由微生物细胞合成的生物可降解性高分子聚合物,它兼有天然与人工合成的高分子聚合物的优点。目前英国ICI公司已将它做外科勿需拆除的支架、缝线等引入医学外科领域,特别是整形美容外科领域〔4〕。而目前我国尚无PHB成品应用于临床医学。本文是我们继“新型生物降解材料PHB细胞毒性试验〔5〕之后所作的全身毒性试验的报告。采用的PHB成品是西北大学、西北工业大学、第四军医大学西京医院整形外科中心联合开发研制的。根据国际标准化组织(Intenational Standard Organization 简称ISO)对医用植入材料的评价标准及其所推荐的生物学试验〔4〕,对PHB进行急性、慢性毒性反应试验,现报告结果如下。
1 急性全身性毒性试验
1.1 被试动物及中毒判断标准 选用清洁级SD大鼠40只,雌雄各半,动物周龄不低于8周,体重130g~150g之间,试验期间给予标准实验室饮食,不予限量,按照随机分配的方法,将动物分为试验组和对照组,每组各有10只雌性及10只雄性,试验组给予试验材料,对照组给予等量的介质,操作过程两组均一致。根据体重变化、中毒症状或有无死亡等,确定为无毒(合格)、轻度毒性、中度毒性、重度毒性及死亡五级〔4〕。
1.2 材料 PHB分子量为1.47×105(粘度法)颗粒状物及膜片状物两种以过粗洗、精洗、消毒,原则上按照ISO文件要求〔6〕:
  试样表面积/浸体介质=3cm2/ml。
  用生理盐水浸提高压灭菌121℃ 1h,用于急性全身性毒性试验。
1.3 给予途径 以每1千克体重50ml剂量标准将试样注入大鼠尾静脉,用相似的方式给予对照组注射相当体积的生理盐水。
1.4 试验结果 动物静脉注射PHB浸出液后立即观察。4、24、48、72小时及第七天未观察到动物出现步态不稳、瘫痪、呼吸困难、惊厥、呕吐、大小便排泄不良等变化,证明PHB浸出液不引起大鼠急性全身性毒性反应。大鼠体重呈增长趋势,均无死亡和中毒反应。

2 慢性毒性反应及植入刺激性反应
2.1 动物和试验材料同急性全身毒性反应
2.2 试验方法 试验前将大鼠背部脊柱两侧用10%硫化碱脱毛,面积8cm2,检查脱皮区无皮肤损伤及皮肤刺激反应后,进行试验。无菌手术将直径10mm×2.5mm PHB制品植入背部皮下,左右两侧各一,每天定时观察植入部位有无皮肤刺激、感染、坏死等变化,每两周称体重一次,连续观察两个月至十二个月;戊基巴比妥钠麻醉动物后,立即由下腔静脉采血,作血液及血液生化学常规检查,分别检查植入部位周围皮下组织有无病变,并作必要的病理组织学检查。
2.3 试验结果
2.3.1 一般情况观察 PHB制品植入大鼠背部皮下两个月后,动物一般行为表现、胃肠道反应、食饮、大小便等,与未植入的正常动物均无明显差异(P>0.05),体重变化见表1。

表1 PHB制品植入大鼠皮下不同时间对体重的影响(g,±S)


组别 n 植入前 植入2周 4周 6周 8周
试验组
对照组 10
10 156±21
159±24 170±23
174±25 205±26
199±31 235±29
229±30 259±33
256±28

2.3.2 血液学检查 PHB制品植入大鼠体内2个月对血液学指标影响见表2,3
表2 PHB植入大鼠皮下对红细胞,血红蛋白的影响(±S)


组别 n 红细胞(×1012/L) 血红蛋白(g/L)
试验组
对照组 10
10 4.07±0.41
3.67±0.86 119.07±15.82
107.00±24.88

表3 PHB植入大鼠皮下对白细胞总数
(×109/L)及分类(%)的影响(±S)


组别 n 白细胞 嗜中性 淋巴 单核 嗜酸性
试验组
对照组 10
10 6.90±1.21
5.77±1.88 22.0
26.3 73.7
70.5 2.3
1.5 2.0
1.5

2.3.3 血液生化检查 PHB制品植入大鼠体内对血液生化学指标影响见表4~5
表4 PHB制品植入后对血浆总蛋白、白蛋白、球蛋白影响(±S)

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